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流式細(xì)胞檢測(cè)--標(biāo)本的制備方法
發(fā)表者：北京博奧森生物 發(fā)表時(shí)間：2016-2-15
流式細(xì)胞檢測(cè)標(biāo)本樣品的制備方法（供參考）
1 目標(biāo)細(xì)胞原本就處于單細(xì)胞狀態(tài)，如單細(xì)胞懸液制備就比較簡(jiǎn)單。
2 目標(biāo)細(xì)胞來(lái)源于外周血（PBMC，外周血單核細(xì)胞），用FICOLL密度梯度離心，單個(gè)核細(xì)胞再用PBS洗滌重懸即可。
3 目標(biāo)細(xì)胞來(lái)源于胸水、腹水、腦脊液等，只要將各種體液離心沉淀，PBS洗滌幾次，用濾網(wǎng)過(guò)濾即可。
4 目標(biāo)細(xì)胞是體外培養(yǎng)的細(xì)胞，若為懸浮細(xì)胞，直接收集即可。
5 目標(biāo)細(xì)胞若是貼壁細(xì)胞，用胰酶消化后收集即可。
6 目標(biāo)細(xì)胞是免疫器官內(nèi)的細(xì)胞：如骨髓、胸腺、脾、淋巴結(jié)等，由于這些組織器官主要有免疫細(xì)胞組成，細(xì)胞與細(xì)胞之間的緊密接觸很少，而且其中含有的纖維結(jié)締組織較少，所以可以直接采用機(jī)械研磨法得到單細(xì)胞懸液。
7 骨髓比較特殊，其組織疏松，使用研磨法磨碎，然后用濾網(wǎng)過(guò)濾一次就可以得到單細(xì)胞懸液。注意：研磨棒與組織接觸的部位不要太硬，最好是有一定彈性的橡膠（如注射器的內(nèi)芯），同時(shí)研磨時(shí)不要太用力，否則得到的單細(xì)胞懸液含有很多死細(xì)胞和細(xì)胞碎片，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
8 目標(biāo)細(xì)胞來(lái)自實(shí)體器官，如肺、肝臟等，可用酶消化法得到單細(xì)胞懸液。將實(shí)體臟器用剪刀剪成細(xì)小碎片，加入用于消化的IV型膠原酶，置于37℃孵箱中消化，消化的時(shí)間根據(jù)臟器的不同而定，然后用研磨棒磨碎過(guò)濾即可得到單細(xì)胞懸液。
9 腫瘤組織也可采用上述方法。
